Відстеження однієї молекули (SMT) зазвичай передбачає використання флуоресцентно мічених молекул, таких як білки або нуклеїнові кислоти, які можна візуалізувати та відстежувати за допомогою флуоресцентної мікроскопії [1,10].
Відстеження окремих частинок (SPT) — це потужний інструмент у мікроскопії, який дозволяє стежити за рухом окремих флуоресцентно мічених частинок (молекул, везикул, віріонів або інших молекулярних комплексів) у середовищі або в живих клітинах і отримувати інформацію про їх динамічна поведінка з часом.
Як працює SMRT? SMRT включає одноланцюгову молекулу ДНК, зв’язану з ферментом ДНК-полімерази. Зв’язана пара потрапляє в камеру секвенування, яка називається проточною камерою. Подібно до секвенування Сенгера, ДНК-полімераза додає комплементарні, флуоресцентно мічені основи до ланцюга ДНК.
Одномолекулярна флуоресцентна спектроскопія наразі є найбільш часто використовуваною одномолекулярною технікою. Основою одномолекулярної флуоресцентної мікроскопії є позначення цікавих молекул флуорофором і спостереження в оптичному мікроскопі.
a Поодинокі частинки виявляються, а проміжок часу записується у файл стека. Необроблені зображення розгортаються, фільтруються та просторово вирівнюються. Потім піки флуоресценції точно локалізуються за допомогою двовимірної підгонки Гауса.
Під час одноразового відстеження на одній колії відбуваються роботи з технічного обслуговування, а на другій потяги можуть продовжувати рух. Щоб потяги їздили на одній колії, ми зазвичай збільшуємо час між поїздами в кожному напрямку.